细胞学实验考试总结

细胞学实验考试总结

名词解释

1.渗透压：水从低渗溶液穿过半透膜进入高渗溶液时产生的压力。水分子通过半透膜向溶

液扩散的现象称为渗透现象，简称渗透；溶液促使膜外水分子向内渗透的力量即为渗透压。

2.高渗：体内的渗透压高于体外，水由环境中向体内扩散，体内的盐分向外扩散。

通过排泄作用排出多余的水，盐分通过食物和组织摄入。

3.低渗：体内的渗透压低于体外，水由体内向环境中扩散，环境中的盐分向内扩散。水和

钠同时缺失，但缺水少于缺钠，血清钠低于正常范围，细胞外液呈低渗状态

4.凝集素：是一类含糖的并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的

作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

5.差速离心：利用不同物质沉降速率的差异，在不同离心速度下分离和收集不同颗粒的离

心技术。常用于分离细胞匀浆中的各种细胞器。6.荧光：某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，

就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光，这种光成为荧光。

7.自发荧光：有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，成为自发荧光。8.次生荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光材料后同样也能发出荧光，这种

荧光称为次生荧光。

9.活体染色：是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害的一种染色方法。分为体内

染色和体外染色（超活染色）。

10.细胞培养：在实验室中用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物

体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。

11.组织培养：从机体分离出的组织或细胞在体外人工条件下培养生长的技术。

12.原代细胞培养：是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直接到

第一次传代为止。

13.传代细胞培养：是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移接种到另一培养瓶

的培养。原代培养形成的单层细胞汇合以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，都将影响细胞的生长，这一程序常称为传代或传代培养。

原理：1.细胞骨架原理细胞骨架是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构。根据蛋白质纤维的直径，组成成分和组装结构的不同可分为微丝微管和中等纤维，其对于维持细胞的形态结构及细胞运动物质运输，能量转换，信号传导和细胞分裂等有重要的作用，本实验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料，可将细胞膜的膜结构和大部分蛋白质抽提调，但细胞骨架系统蛋白却被保存下来，后者用R250染色在光学显微镜下可见一种网状结构。

为什么用TritonX-100不用SDS

因为TritonX-100为去污剂，把骨架蛋白以外细胞膜细胞质蛋白剥离掉，无离子性。SDS有离子性，去污性强容易破坏细胞膜。PBS作用：PH保证、与细胞渗透压相近。戊二醛作用：固定蛋白，保证细胞形状。考马斯亮蓝R250作用:与蛋白特异性结合。2．细胞凝集反应:

在某一种蛋白如土豆中，有多个位点可以与其他细胞结合，而且蛋白之间可以聚集，使多个细胞聚集在一起。以PBS液加2%血细胞液作对照试验因为太稀不容易使红细胞凝集，太浓分辨不出来是自身堆积在一起还是由于凝集素使其凝集在一起。

3.Feulgen染色原理DNA经弱酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生，是由于反应物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明了Feulgen的专一性。亚硫酸配制：10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml。蒸馏水100ml。1mol/LHCL5ml。

4.传代细胞培养原理第一步制备细胞悬液，当细胞生长成致密单层时，它很容易被蛋白水解酶和EDTA所破坏。因为EDTA对钙、镁离子具亲和力，而这两种离子又是细胞保持紧密结合所必需的因素。所以一般采用胰蛋白酶和EDTA的混合物，作为消化液。培养基用EMEM液(90%)犊牛血清(10%)双抗、3%谷氨酰胺1ml、7.4%NaHCO3（PH7.0~7.2）.其核心是培养基与消化液（0.02%EDTA或0.004%EDTA+0.5%胰蛋白酶液各一半）。主要步骤是消化与分装。5.动物细胞培养

细胞培养的优点：一便于研究各种物理，化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响，二便于对细胞生长及发育过程的观察

细胞培养必须满足两个条件：一是供给细胞存活所必须的条件，二是严格控制无菌条件

6.ABO血型用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。大部分为RH阳性。正定型反定型

被

（标准（标准红细胞+被检者血

检

血清+清）

者

被检者

血

红细

型

胞）

O型

抗抗A型红B型红

红细

AB细胞细胞

胞

＋－A－＋－－＋B＋－－＋＋AB－－－－－O＋＋－7.细胞融合原理

掌握利用聚乙二醇为介导物对各类细胞的融合方法。聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。

影响融合率的因素1.温度2.PEG分子量3.细胞融合时PEG浓度。4.PEG作用时间5.所要进行融合细胞种类。8.流式细胞仪原理

流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。作用：1、计数2、测细胞周期3、测特异性蛋白影响其测量效果因素：9.细胞膜屏蔽哪些：

盐、无机离子、极性大分子。

允许进入：脂溶性、水、非极性、有机小分子、NH4+10.线粒体和液泡的染色

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料胶粒表面带阴离子，而被染得部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样他们彼此之间就能发生吸引作用，一般以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在脂类的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和叶泡系的染色各有专一性11.叶绿体分离与荧光观察将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法（先1000r/min2min弃沉淀再3000r/min5min弃上清）12.细胞膜的渗透性原理

将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以深入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质投入速度不同，因此溶血时间也不同。

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