5月份工作总结

5月份工作总结

5月份工作总结

一田间工作

这个月在田间主要帮张师兄测株高，刘师兄育苗和挂牌。二实验室

1遗传差异实验

(1)发苗5.2号总在育苗盘中发了33个亲本和杂交组合（详见下表）的苗，每个组合五穴，每穴丢三颗种子。CMo17Mo1718白C478478自330C黄早四*A619C48-248-2A619C黄早四黄早四C478C48-2*18白C黄早四Mo17C黄早四*47848-248-2*18白CMo17黄早四C478*自330C48-2C黄早四Mo17478C478*48-2CMo17*48-2黄早四黄早四Mo17C48-2*478黄早四目前在这个扩大后的群体CMo17Mo17C478478C48-248-2C黄早四黄早四C478C48-2*18白C黄早四Mo17C黄早四*47848-218白自330A619C478C48-2*A619C黄早四47848-2*自330黄早四Mo17C48-2*478黄早四478CMo1748-2*18白C478*自330黄早四C48-2C黄早四Mo17478C478*48-2CMo17*48-2黄早四黄早四中，只有以下六个组合C47848-2C48-2*A619待多营取材478*自330待多营取材黄早四478*18白无种子还没有发苗，准备让徐浩师兄帮我取样。478*18白这个组合无种子，暂时待找到种子。（2）DNA提取

以下是育苗20天后的生长情况图片

图一育苗结果图二育苗结果

图三育苗结果图四育苗结果将这33组合中得C48-2和48-2全部提取DNA，其他组合随即选取三株提取DNA,编号如下：组合提取个数编号C48-238S148-234S2A6193S3C48-2*18白3S4C478*18白3S5C黄早四*18白3S6黄早四*18白3S7C478*黄早四3S8C478*Mo173S9C478*48-23S10CMo17*48-23S11CMo17*4783S12CMo17*黄早四3S21C48-2*黄早四3S14C48-2*4783S13C48-2*Mo173S15C黄早四*4783SC黄早四*48-23S17C黄早四*Mo173S18CMo173S19C4783S20C黄早四3S22Mo173S234783S24黄早四3S2518白3S26自3303S27C黄早四*A6193S2848-2*18白3S29CMo17*自3303S30C478*自3303S31C黄早四*自3303S32C48-2*自3303S33选取所提取的部分DNA对其浓度进行测定和1%的琼脂糖电泳检测，结果如下：

图五DNA检测结果

2RNA提取

RNA的提取和DNase处理

实验前准备：为防止RNA降解，金属、玻璃器皿180℃高温处理6h以上，塑料制品用0.1%的DEPC水浸泡处理，高温灭菌后烘干使用，所用试剂溶解液需用0.1%的DEPC水溶解，实验过程中需带灭菌的手套进行。RNA的提取使用Trizol法，步骤严格按照说明书要求进行。

（1）取0.1g的叶片于液氮预冷的研钵中，加入液氮，迅速研磨，加入1ml的Trizol覆盖，待液体完全融化后，继续研磨直至液体透明清亮。将液体转入1.5ml离心管，室温放置5min，使其充分裂解，4℃下1201*rpm离心5min；

（2）取上清于另一1.5ml的离心管中，加入0.2ml氯仿，充分振荡混匀30~40s，室温放置5min，4℃下1201*rpm离心10min；

（3）弃沉淀，取上清于另一1.5ml的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀后室温放置5~10min，4℃下1201*rpm离心10min；

（4）弃上清，RNA沉于管底，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，温和振荡离心管，悬浮沉淀，4℃下1201*rpm离心3min；

（5）尽量弃上清，室温晾干或真空干燥5~10min，干燥后加入40μlDEPC水溶解RNA；

（6）RNA的DNase处理。反应体系如表4：

表4.PCR反应体系Table4PCRreactionsystem

药品

RNA

DNaseI（5U/μl）RNase-FreeH20RNasin（40U/μl）10×DNaseI缓冲液

用量10-20μg

2μl

加至50μl0.5μl5μl

以上成分37℃温浴30min后，适量的RNase-Free水溶解，并于-70℃保存。且用核酸蛋白仪测定RNA样品的OD260/OD280值，测定其纯度和浓度。用1.0%琼脂糖凝胶电泳，更换新的0.5%TBE缓冲液，电压140V，快速检测RNA。结果如下图：

从图中可以看出RNA提取结果不好，RNA发生降解，主要原因可能是操作的原因，也可能是实验前准备工作没做好，以后一定要花大力气改进，争取提取出可用的RNA。三文献阅读

本月由于田间劳动的原因，只读了三篇中文文献，两篇英文文献，中文文献

1基因表达调控与选择性剪接机制研究

这篇文章是201*年发表在电子学报上的文章，由于当时还没有高通量测序技术，所以是以cds序列通过EST来研究RNA可变剪接的机制以及影响因素，这篇文章的两点就是建立了AsMaIndb并进行了多序列比对算法ASALIGN，没有进行任何实验验证，所以是一片生物信息学文章。由于距现在时间较远，所以实验方法不具备参考价值。

2拟南芥SDIR1基因转录的选择性剪接

这篇文章是201*年发表在云南植物研究上的一篇文章，他采用PCR及RT-PCR法分别克隆了拟南芥SDIR1基因的DNA和CDNA，并通过序列对比发现了三种转录本，并对已报道的SDRI1基因的序列进行对比，发现三个转录本编码产物不同，并用RT-PCR研究了SDRI1基因的表达量。这篇文章对我研究RNA可变剪接作用很大，我可以参考他的实验方法以及思路，用我们测序的结果和玉米B73的序列设计引物扩增出目的基因，并反转录成cDNA后通过转化测序和B73序列对比，证实发生了可变剪接和发生可变剪接后的编码产物的变化。3小麦光周期基因PPd-B1的选择性剪接分析这篇文章是201*年发表在作物学报上的文章，是我们学校小麦所做的。他们也是通过提取RNA后反转录成cDNA，并通过序列对比研究可变剪接的，实验方法没有公开，不能借鉴，但他们发现同一个基因可以存在多种可变剪接方式，并且将剪接位点具体到第几外显子，还是对我的研究有很大帮助的。英文文献

1Genome-wideDetectionandAnalysisofAlternativeSplicingforNucleotideBindingSite-Leucine-RichRepeatsSequencesinRice

这篇文章是201*年发表在JournalofGeneticsandGenomics上的，这是一篇生物信息学分析的文章，其中涉及到几个软件，Sim4,AIR,Spidey,BLAT,EST_GENOME,EXALIN,GeneSeqer,MGAlignIt可以识别可变剪接和内含子多态性。他们是从生物信息学角度出发通过不同的数据库建立了HMM（隐马尔科夫模

型）然后通过不同软件分析可变剪接。这些软件对我研究可变剪接还是很有意义的。

2SurveyofthetranscriptomeofAspergillusoryzaeviamassivelyparallelmRNAsequencing

这篇文章是201*年发表在NucleicAcidsResearch上的一篇文章，这篇文章和我们的测序报告完全一样，他们也是201*年华大基因测序，测序后根据测序报告对差异表达、可变剪接、新转录本、新外显子、新基因进行了验证，他们设计引物随机选取一个验证成功后即可确定测序报告的正确性，里面有验证的实验方法，值得借鉴。

6月份工作计划已经提取出遗传差异实验所需的大部分DNA，并已经合成了AC204515.3-10CGTGTCGTGTGCAATTTCTTGGGTGGGATTGTTTAAGCCTBAC-SSR这个引物，所以要在最快的时间内提取剩余五个组合的DNA，争取在六月份完成遗传差异实验。

扩展阅读：生产部5月份工作总结及6月份工作计划

生产部5月份工作总结及6月份工作计划

一、5月份工作总结

1．生产部对厂部值班、周检进行跟踪、督促，对存在的问题进行指出、批评。对车间的故障台帐等各种台帐进行检查、考核。完成生产部制度的初次汇编。2．调度初步做好了全厂水、电、煤的消耗、甲醇产量的统计台帐，为我们的成本核算提供了初步数据。

3．和区域销售部相关领导沟通，完成销售前期准备部分工作，成功打通销售流程，进行了液氧和甲醇的充装和销售演练。完成了空分灌区充装安全条件的落实。

4．给排水：完成了新增外排污水管的改造；对生产用水，污水排放、浓盐水等排放进行合理控制，保证了生产正常运行。

5．燃料动力：两台锅炉基本实现较长周期运行，保障了生产稳定运行。人员离职较多，及时做了思想工作及招聘、培训。

6．空分实现了较长周期的稳定运行；氩系统调试合格，产出了合格的氩气；完成产品销售的各项安全工作，实现了液氧、液氮的销售。完成氧泵联锁的调试及投用。

7．气化：单台气化炉实现了较长周期运行，两台气化炉也初步实现了满负荷运行（20小时左右）。及时停车处理了705两个蒸汽发生器E1503、E1504漏点。8．合成：产出了合格的甲醇，系统初步实现了稳定运行；504灌装站投用正常；精馏加压塔再沸器、常压塔水冷器漏点及时进行了检修处理。对精馏常压塔进口管高度进行了改造。正在对804装置进行调试。

9．质检中心配合全系统开车做好了分析工作；配合人力加紧人员招聘的工作；催促备品配件和化学试剂到货，但此工作进展不顺利，已影响到正常生产。二、6月份工作计划

1．生产部继续抓好工艺纪律、生产记录、工艺指标、交接班检查、考核工作；对厂部值班、周检进行跟踪、督促。汇总生产部车间台帐目录，对格式、名称等进行规范。

2．完成生产部制度的汇编审核。完成迷你操作手册的定稿工作，并报采购计划。3．打通甲醇销售流程，完成甲醇销售任务。4．调度做好生产的组织和协调、调度工作；做好两台气化炉满负荷运行，全系统考核工作；做好6月份停电1天的开停车计划工作。做好全厂水、电、煤的消耗、甲醇产量的统计工作，积累出比较有代表性的数据。

5．给排水：做好节能降耗工作，保证脱盐水质及水量、保证循环水压力、温度正常，保证消防水正常。污水调试正常，合格排放，同时做好应急预案。6．燃料动力：保证2台锅正常稳定运行，降低消耗；完成成品磅协调投运；做好新进员工的安全教育及上岗培训工作。改善现场环境卫生。

7．空分：保证系统安全稳定运行，产品合格；保证产品销售安全及时。提高负荷，保证气化两台炉满负荷运行。

8．气化：做好2台气化炉满负荷运行的各项工作，实现2台气化炉满负荷稳定运行。做好节能降耗工作。做好人员四班三倒的工作。

9．合成：做好全系统满负荷运行的各项工作，实现系统满负荷运行，进行优化。保证甲醇产量和质量。完成804装置开车、正常运行。保证产品销售安全及时。10．质检中心：及时做好各项取样、分析工作；做好各产品的分析检验工作。8．做好各项安全工作，确保安全零事故。

生产部201*-5-

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