Leica全自动染色封片工作站的使用体会

Leica全自动染色封片工作站的使用体会

Leica全自动染色封片工作站的使用体会

随着病理学技术的迅速发展，全自动染色封片一体化工作站以其卓越的性能和良好的处理效果，特别是其稳定、高效的染色过程，逐渐被各大医院和相关实验室接受并使用，并逐步替代目前的人工染色。自将工作站应用于常规HE染色以来，经过近10万例的实际应用，切片染色效率明显提高，染色效果稳定，染色质量显著改观。1材料与方法1.1仪器设备

德国Leica","p":{"h":16.932,"w":37.603讨论

传统手工染色操作繁琐，劳动强度大，温度、时间、试剂、环境、个体差异等因素皆可影响染色效果，不适合大批量标本的染色处理。而全自动组织切片染色机因其独特的以人为本的智能化设计理念、周到而完善的处理程序，不但极大地保证了切片染色质量的高效性、稳定性，还可以减轻工作强度和改善工作环境。3.1优点

3.1.1效率高可进行批量标本的染色，最多12个染色架同时染色，每个染色架装30张切片，并可同时运行多个程序，尤其适用于标本量大的单位。与传统手工染色相比，染色同时工作人员可进行其他工作（如切片），工作时间统筹化，整体工作效率得以提高。

3.1.2稳定性好染色封片工作站的各步骤均由单片机控制，时间控制精准、严密。在程序设定合理的前提下，染色效果更稳定[3]。有报道，室温低于15℃时染色效果不佳，应适当提高室温[2]。我科室日常工作中室温始终保持在23℃左右，染色效果稳定，无明显差异。可设置数个精确步骤（如苏木素、分化），当相邻染色架出现时间冲突时，优先确保精确步骤染色。3.1.3保障具有断电记忆功能，断电重新启动后，可以继续染色流程，不必从头重复染色。可选配UPS电源，在主电源缺乏时持续供电，保障染色工作继续完成。

3.1.4安全工作站在相对密闭的空间中进行染色封片，大大减少了有毒挥发性试剂（尤其是二甲苯）对工作环境及工作人员的危害。我科室将染色工作站放于通风橱中，更加有利于对环境和人员的保护。

3.1.5便于质控自动染色机调整好各步骤时间，可产生精确而连贯的染色、分化、脱水等过程，与传统染色相比，受人为因素影响较小；同时可以限定各染色切片的数量，到达使用期限，机器会自动报警提示，对常规染色的质量控制提供了可靠平台。3.2日常使用时的注意事项

3.2.1染缸的排列染缸中的液体尽量按照染色步骤依次排列，所有需要冲水的步骤都应靠近水缸，并使机械臂行进的路线时间最短化；机械臂前进时有一定的回转，合理设计避免玻片上的试剂滴入其他染缸造成污染；透明用二甲苯靠近染色机出口位置，便于将玻片快速转入封片机进行封片。

3.2.2试剂的使用与更换根据实际工作情况，我科使用成品Harris苏木素染液（珠海贝索），染片约2500张；使用0.5%水溶性伊红，滴加1～2滴冰醋酸促染，染片约","p":{"h":15.839,"w":15.84,"x":631.95,"y":451.768,"z":90},"ps":null,"t":"word",综上所述，全自动染色封片工作站操作简单方便，染色效率高效果好，改善工作环境。除应用于常规HE染色外，在部分特殊染色和快速冰冻切片染色中也得到较好应用，充分发挥其优势，更好促进病理技术的发展。

扩展阅读：新型全自动免疫组化染色机在临床工作中高标准化应用体会(1)

新型全自动免疫组化染色机在临床工作中高标准化应用体会

马铁，纪莲，姜卫国

121

（1中国医科大学附属盛京医院.病理科；2.中国医科大学附属盛京医院实验研究中心动物室，沈阳110004）

摘要目的探讨新型全自动免疫组化染色机在临床病理工作中高标准化操作的应用。方法选择病理

工作中常用的ER、PR、Ki-67、CD3、CD20、P504S、P63、CK等30余种抗体，分别使用其即用型及浓缩型试剂，使用BondPolymerRefineDetection（聚合物精细检测）及新型全自动免疫组化染色机进行免疫组化染色。结果使用即用型一抗染色效果偏强，使用浓缩型一抗达到最佳染色效果，切片着色均匀，阳性结果定位准确，背景清晰，无边缘效应，无非特异性着色。结论新型全自动免疫组化染色机染色全过程实现机械化，标准化程度高，操作简便规范，染色结果可靠，节约试剂成本，为临床病理诊断提供有力依据。

关键词全自动；免疫组化；高标准化；染色

Researchonhighstandardizationofthenovelautomaticimmunohistochemistrystainerinclinicalpractice

AbstractObjectiveToexploretheapplicationofthenewautomaticimmunohistochemicalstainingmachineinclinicalpathologywithhigh-standard.MethodsMorethan30kindsofcommonantibodies(ER,PR,Ki-67,CD3,CD20,P504S,P63,CK,etal,includingimmediateandconcentratedtype,respectively)ischosentostainwithBondPolymerRefineDetection(polymerfinedetection)andthenewautomaticimmunohistochemicalstainingmachine.ResultsThedyeingeffectoftheimmediatetypeisstronger.Tousetheconcentratedcanachievethebestdyeingeffect,withcoloruniformity,accuratepositioningofpositiveresults,clearbackground,withoutedgeeffectandnon-specificcolor.ConclusionThenewautomaticimmunohistochemistrystainingmachineismechanizationduringthewholeprocess,highstandardizationdegree,simpleandnormativeoperation,reliabledyeingresults,reagentsaving

cost,canprovideastrongbasisforclinicalpathologydiagnosis.Keywords:

目前国内多数医院病理科使用自动免疫组化染色机进行免疫组化染色

［1］

。但多数自动

免疫组化染色机未完全实现“全自动”（如不能进行脱蜡及抗原修复等），某些步骤还需要手工操作。此外，操作时还需用免疫组化笔对染色区域进行划定；若玻片清洁度不佳、染色架倾斜等，会出现染色不均现象

［2］

。这在不同程度上制约了免疫组化染色标准化的发展

［3］

。

我科室近年使用德国Leica公司生产的BOND-MAX型全自动免疫组化染色机，该染色机全过程实现机械化，标准化程度高，操作简便规范。笔者在使用过程中有如下体会。1.材料与方法

1.1材料用防脱载玻片常规制备3μm厚各种常用一抗阳性对照切片若干张，经62℃烤片2小时后备用（以下简称待检切片）。

1.2仪器设备德国Leica公司全自动免疫组化染色操作仪，计算机，手持式ID扫描仪，玻片标签仪，Covertile（玻片盖）。

1.3试剂ER、PR、Ki-67、CD3、CD20、P504S、P63、CK等30余种一抗，BondPolymerRefineDetection（聚合物精细检测），洗涤溶液，抗原修复液，脱蜡溶液。

1.4实验方法设立3个实验组：即用型一抗试剂组、与即用型一抗试剂相对应同种浓缩型一抗试剂组（以下简称浓缩型一抗试剂组）、以及阴性对照组。使用新型全自动免疫组化染色机进行免疫组化染色。

⑴即用型一抗试剂组：将待检切片贴上标签放入染色机中，按染色机操作流程，结合一抗说明书要求设定是否进行抗原修复、抗原修复液种类及修复时间，使用市售即用型一抗试剂对待检切片进行免疫组化染色，镜检，观察结果。

⑵浓缩型一抗试剂组：用抗体稀释液将常用浓缩型一抗试剂按说明书推荐效价进行倍比稀释，按染色机操作流程使用倍比稀释后的一抗对待检切片进行免疫组化染色，直至一抗倍比稀释后的浓度染色出现弱阳性或阴性结果，镜检，观察结果。

⑶阴性对照组：用PBS缓冲液代替一抗，按染色机操作流程对任意待检切片进行免疫组化染色，镜检，观察结果。

1.5染色机操作流程⑴启动Bond软件，进入Bond操作系统。⑵输入病例详细信息：包

括病理号、试剂滴加容量、制备操作规程、玻片详细信息（是否烤片、脱蜡等）、抗原修复方式

［4、5］

等。⑶经玻片标签仪打印标签，将标签贴在待检组织切片磨砂侧。⑷待检组织切

片放入玻片架凹槽内。⑸Covertile（玻片盖）覆盖于切片表面。⑹玻片架放入染色机中。⑺各种一抗按各自效价稀释好装进试剂瓶内，放入染色机中。⑻BondPolymerRefineDetection（聚合物精细检测）放入染色机中。⑼检查洗涤溶液、抗原修复液、脱蜡溶液、酒精等大容量试剂瓶中试剂量是否充足。⑽一切准备就绪，仪器开始运行，直至苏木精复染结束。⑾取下切片，经脱水、透明、中性树胶封固。2结果

经全自动免疫组化染色机进行免疫组化染色标记，即用型一抗试剂组ER、PR、Ki-67、CD3、CD20、P504S、P63、CK等30余种切片染色效果均偏强，阳性结果定位准确，背景较清晰（如图1）；

浓缩型一抗试剂组在说明书推荐效价内的ER、PR、Ki-67、CD3、CD20、P504S、P63、CK等30余种一抗浓度切片染色效果亦均偏强，阳性结果定位准确，背景较清晰；而达到最佳染色效果切片的一抗浓度均高于说明书推荐效价，切片着色均匀，阳性结果定位准确，背景清晰，无边缘效应，无非特异性着色（如图2）；

阴性对照组切片无DAB着色，细胞核蓝染，背景清晰。

图1乳腺浸润性导管癌，PR细胞核阳

性，一抗选用市售即用型抗体，细胞核大部分棕黄色，浓染，局灶间质纤维细胞着色200×

图2乳腺浸润性导管癌，PR细胞核阳

性，一抗选用浓缩型抗体1:4000倍稀释，细胞核大部分棕黄色，着色均匀，定位准确，背景清晰200×

3体会

近年来，病理学界大力倡导标准化和质量控制，在新抗体、新技术不断涌现的今天，免疫组化检测标准化不仅为疾病的诊断提供有力帮助，对临床治疗也发挥越来越多的指导作用。新型全自动免疫组化染色机是病理科实现高标准化和质量控制的便捷而可靠的工具。

⑴全程实现标准化。该染色机有玻片加热功能，切片后可直接进行烤片、脱蜡、抗原修复等工作，各步骤温度、时间恒定；抗原修复时可根据一抗修复要求，选用不同抗原修复液，而且多张切片不同修复方法可同时进行，避免手工操作易造成混乱。

⑵操作简便，完全实现自动化。只需将贴好标签的切片及所需试剂放入染色机中，点击开始按钮，机器便会根据标签信息自动完成免疫组化染色全过程（包括烤片、脱蜡、抗原修复、抗体滴加、苏木精复染等），整个流程完全不需要病理技术人员手工干预，既使不同的工作人员进行操作也不会出现染色结果的波动；但操作时应注意将相同操作程序的切片放入同一玻片架（如有的切片需进行烤片，有的切片不需进行烤片应分别放于不同的玻片架）。

⑶BondPolymerRefineDetection（聚合物精细检测）灵敏度较高，使用市售即用型一抗染色效果偏强，必须稀释一定倍数后使用，因同种不同批次即用型一抗试剂售出时稀释浓度不尽相同，故每次更换一抗均需对新抗体和检测系统进行最佳实验条件的预试验，以确定一抗最佳稀释浓度，这无形中增加技术人员的工作量，同时也造成检测系统试剂浪费。笔者在大量工作中不断摸索，反复试验，发现如使用浓缩型一抗，可较好解决此问题。只需在第一次购入时对抗体和检测系统进行最佳实验条件的预试验，确定一抗最佳稀释浓度，消耗殆尽时再订购同一试剂厂家产品，按上次预试验确定的稀释浓度稀释即可。而且在实际工作中一抗最佳稀释度往往高于试剂说明书建议稀释度（如PR抗体，试剂说明书建议稀释浓度为1:100～1:200，但笔者经过预实验确定最佳稀释度为1:4000），大大节约了订购一抗试剂的成本。但值得注意的是每次不可配置过多，应少配勤配，防止使用时间过长导致效价下降，影响染色结果。

⑷采用独特设计Covertile（玻片盖），可使试剂均匀覆盖于组织表面，避免染色过程中干片，使组织染色均匀一致，而且省去多数免疫组化染色机用免疫组化笔划定试剂加入范围的过程，省时省力；但玻片架送入染色机时不可用力过大，否则易造成Covertile（玻片盖）错位，导致试剂不能正常加入。Covertile（玻片盖）使用后表面会有DAB残留物附着，可用新配制的“健之素牌消毒片”（其有效成份为三氯异氰尿酸）浸泡2-4小时，然后用流水冲洗，再用70%乙醇浸泡2分钟，或用蒸馏水洗三次，每次3分钟，晾干备用。笔者发现若用流水冲洗后直接晾干，易产生水渍；若用100%乙醇浸泡，易导致Covertile（玻片盖）出现裂纹，影响染色效果。

⑸染色机上有水平指示装置，可随时观察染色机水平状态，从而防止因实验台面倾斜而导致切片染色不均。

⑹洗涤溶液、抗原修复液、脱蜡溶液、酒精等大容量试剂瓶中无液面感应装置，每次运

行前均需对这些试剂容量进行检查，确保充足后，再进行染色。

⑺此机废液采用有害和无害分瓶处理方式，有害废液可集中统一处理，避免对周围环境造成污染，有利于环保健康。

综上所述，按照国际免疫组织化学标准化的要求，在病理实验室中成功开展免疫组织化学技术的关键是标准化。新型全自动免疫组化染色机真正实现全自动操作，标准化程度高，操作方便，而且染色结果可靠，背景清晰，重复性好。但全自动染色机也不是万无一失的，要做好每一张免疫组化切片，除了要注意以上事宜，还要求病理技术人员具有高度的责任感和精益求精的工作作风，需经常检查设备运行状况，注意染色操作中的各个细节，每次染色后均要进行染色结果“初审”，在显微镜下观察是否定位准确，发现问题及时调整和解决，这样才能为病理诊断提供可靠的依据。参考文献：

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［2］杨月红，袁静萍，袁修学，等.自动免疫组化仪的使用体会[J].临床与实验病理学杂志，

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［3］郭海燕.利用自动免疫组化染色机进行免疫组化质控分析[J].中国实用医药，201*,4

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immunohistochemistry:aconcisereviewwithpracticalconsiderations.ApplimmunohistochemMolMorphol.201*，8(3)：228-235

具体修改意见见文中，修改后发表。

补充作者简介：内容包括作者姓名（出生年），性别，籍贯，职称，学位，主要研究方向。补充英文关键词，需与中文相对应。参考文献4补充页码。

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